脐带间充质干细胞治疗膝关节炎患者临床疗效观察

   时间:2018-12-22 16    浏览:8914   标签: 干细胞治疗 脐带多能干细胞 间充质干细胞

  摘要:目的:本文应用脐带间充质干细胞(UC-MSC)探讨治疗OA的疗效,为临床治疗OA寻找新途径。 方法:对XXX医院12例符合要求的膝关节骨关节炎患者随机分为治疗组和对照组各6例。治疗组进行脐带血来源的间充质干细胞移植治疗。对照组关节腔注射玻璃酸钠。比较治疗前及治疗3、12个月后膝关节的WOMAC、Leuquesne指数总评分。 结果:治疗3个月后治疗组及对照组的WOMAC总评分均较用药前有显著改善(P<0.05)。但两组间比较差异不显著(p>0.05)。治疗12个月后治疗组WOMAC总评分均较用药前有显著改善(P<0.05),对照组无明显变化(p>0.05)。治疗3个月后,两组Lequesne指数差异有统计学意义(P<0.05),都较前减小。治疗12个月后,治疗组Lequesne指数较治疗前明显下降(P<0.05),但对照组lequesne指数无改善,差异不显著(p>0.05)。治疗前后患者血常规、肝肾功、血清免疫球蛋白及补体C3、C4检测结果无显著变化。 结论:脐带间充质干细胞具有免疫调节、阻止炎性介质释放、减轻组织损伤等重要作用,可减轻和缓解OA的临床症状,且脐带间充质干细胞治疗对人体各项指标无明显改变,安全性很好,为临床治疗OA,寻找到一条新途径。

  关键词:间充质干细胞;膝关节;骨关节炎;临床疗效

  骨关节炎(OA)是一种以关节软骨变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节退行性疾病。目前临床上采用多种方法修复关节软骨损伤,如微骨折术、自体或异体软骨移植术、自体软骨细胞或基质诱导的自体软骨细胞移植术。然而,关节软骨受损后再生修复能力有限,药物治疗效果较差,各种外科治疗如软骨移植术及微骨折术虽能暂时缓解疼痛,但远期疗效并不理想;组织工程性自体软骨细胞或基质诱导的自体软骨细胞移植的发展,为退变关节组织的生物修复或再生提供了可能,但其主要局限在于无法治疗较大的软骨缺损。

  随着干细胞治疗在各个领域的日渐成熟及其显著的治疗效果,已有部分学者开展干细胞移植治疗骨关节炎的动物实验研究。且大多数实验表明干细胞移植治疗骨关节炎有效。作为 OA治疗的理想种子细胞,MSC拥有强大的自我更新、增殖能力及分化潜能,可替代病态细胞;可通过旁分泌和自分泌合成多种生物活性分子如胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅰ、转化生长因子(TGF)-β,血管内皮生长因子(VEGF)等,激活细胞和血管再生途径,对软骨起到营养作用;具有归巢作用,在体内微环境作用下主动迁移至软骨缺血或受损部位进行修复重建;具 有免疫抑制和抗炎作用,即表达主要组织相容性复合体(Mt-IC)-Ⅰ,而逃避宿主的免疫清除,并通过抑制T淋巴细胞活性和抑制自然杀伤细胞分化实现抗炎作用。

  1 资料与方法

  1.1 一般资料

  1.2.1  临床资料

  2011年9月~2013年3月我科住院的膝关节骨关节炎患者l2例。随机分为治疗组和对照组各6例治疗组男l例,女5例,年龄(56.27±7.52)岁,病程(6.21±2.34)年;对照组男2例,女4例,年龄(55.96±6.93)岁,病程(5.97±2.65)年,两组在性别构成、年龄及病程等方面无显著学差异。纳入标准:所有患者均符合美国风湿病协会1995年修订的膝关节骨关节炎分类标准中的《临床+放射学+实验室标准》。

  1.1.2  诊断方法

  (1)WOMAC总评分:治疗前后均在医生指导下完成10mm的VAS24项WOMAC量表评分。但不得替代患者做评分,详细记录各项分数。

  (2)膝关节lequesne指数评分:治疗前后分别进行膝关节Lequesne指数评分,用于膝关节骨关节炎的严重程度、疾病活动及膝关节功能的判断。

  1.2  脐带间充质干细胞制备

  UC-MSC制备过程简述如下:采集新生儿脐带,将脐带剪碎至约1mlTl×1min ×1mlTl,经0.1%胶原酶和0.125%的胰酶37℃分别消化30分钟,先后用100目及200目滤网过滤,去除未消化的组织。过滤后的细胞按1×106/cm2接种于塑料培养瓶,用含DMEM-LG/F12,5%FCS的培养基,置37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱培养,45天后换液,弃非贴壁细胞,以后每3~4天半量换液。待细胞80%融合,0.25%胰酶消化,按1×104/cm2传代。贴壁细胞常规消化后,以FITC标记的CD105(SH2)、CD44抗体及其相应同型对照标记细胞,流式细胞仪检测。获得(1.0~5.6)×107的UC-MSC,流式细胞仪检测阳性率为95%。

  1.3  治疗方法

  治疗组脐带血间充质干细胞移植治疗,对照组进行玻璃酸钠25mg膝关节腔注射治疗。脐带血间充质干细胞移植移植前1周关节腔注射4ml解冻后激活的血小板裂解液.移植前选择存活率不低于90%,且无EBV、HBV、HCV、HIV污染的细胞进行复苏且临用前行胰蛋白酶收集、激活的血小板裂解液重悬处理后混匀分装。

  常规消毒、铺洞巾,持5ml无菌注射器进入关节腔后抽出适量关节液,保留针头,拔出针筒,连接上装有混匀UC-MSC的针筒.缓慢注入。术毕无菌纱布压迫覆盖针眼。仰卧20min。期间间断屈伸膝关节数十次。UC-MSC移植后再次注射4ml解冻后激活的血小板裂解液。

  1.4  统计学处理

  运用SPSS17.0统计软件进行数据分析。对不符合正态分布数据资料的两组间膝关节 WOMAC总评分的比较采用Wilcoxon秩和检验。符合正态分布数据资料的两组间膝关节 Lequesne指数的比较采用两独立样本t检验组内膝关节Lequesne指数治疗前后行配对t检验。检验水准a=0.05(双侧)。

  2  结果

  2.1   WOMAC总评分

  治疗3个月后治疗组及对照组的WOMAC总评分均较用药前有显著改善(P0.05)。治疗 12个月后治疗组WOMAC总评分较前明显下降,但对照组无变化。见表 l。

  表l 两组膝关节WOMAC总评分比较

  治疗组对照组μP

  治疗前685±56634±520.728>0.05

  治疗3个月后269±24237±26

  治疗12个月后223±16175±19

  注:与治疗前比较 ,P<0.05。

  2.2  膝关节Lequesne指数评分

  治疗前,两组Lequesne指数比较,差异无统计学意义。治疗3个月,两组Lequesne指数差异两组均有统计学意义,都较前减小,且治疗组减小更明显;治疗2个月后,只有治疗组Lequesne指数较治疗前下降,对照组无变化。见表2、3。

  表2 两组膝关节Lequesne总评分比较

  治疗组对照组tP

  治疗前17.67±1.4918.19±1.560.3210.534

  治疗3个月后9.24±1.3212.38±1.4224.770.035

  治疗12个月后4.13±1.0117.93±1.2727.3420.000

  注:与治疗前比较 ,P<0.05。

  表3 两组膝关节Lequesne指数评分治疗前后比较

  差值tP

  治疗组d19.12±0.86     0.7280.000

  d213.88±1.024.7740.000

  对照组d16.43±0.796.7680.023

  d21.18±0.8210.2350.092

  3  讨论

  骨关节炎是一种常见的慢性退行性疾病,主要的病理改变为关节软骨退行性改变和关节边缘、软骨下骨质反应性增生。目前的主要治疗以对乙酰氨基酚、NSAIDs类药物、润滑剂及类固醇激素关节腔注射、软骨保护剂为主,但这些治疗方法的疗效有限,且不能阻止疾病 的进展。

  既往研究发现软骨退化是骨关节炎发病中的重要原因,随着年龄的增长软骨退化有增加的趋势,这与软骨细胞自身功能的退化息息相关。研究显示,UC-MSC也具有强大的抗炎作用和免疫调节作用,能通过多种因子的分泌和细胞间相互作用来调节关节局部微环境和激活 内源性祖细胞,而起到发挥修复受损组织的作用,这使UC-MSC有可能成为治疗骨性关节炎理想的种子细胞。

  本研究发现,经UC-MSC移植治疗3、12个月后其膝关节WOMAC总评分及膝关节 Lequesne指数评分均较前下降明显。而玻璃酸钠注射组只有在治疗3个月后有效。治疗12个月后无明显变化。UC-MSC移植治疗无论在治疗的早期还是晚期其临床症状均有改善.而玻璃酸钠注射治疗只在早期起效。长期治疗效果不显著,故UC-MSC移植治疗不失作为常规治疗无效的骨关节炎患者治疗的新的选择,而且可以通过对大多数主要免疫细胞的调节来实现强大的免疫抑制和抗炎功能。


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